В собрании музея хранится уникальное знамя, связанное с именем первого Императора России – Петра Великого.
Знамя было жаловано Войску Донскому Императором Петром I 28 февраля 1722 года за участие в Северной войне (1701-1721). Эта высокая награда хранилась вместе с прочими донскими регалиями в Черкаске. Однако оно, как и многие другие реликвии, погибло во время пожара в 1744 году. Дщерь Петрова, императрица Елизавета воссоздала его в том же 1744 году. Позже точная копия знамени была воспроизведена (по причине ветхости) по указу Императора Александра I в 1803 - 1804 гг. Общий вид знамени сохранился в кн. Висковатова А.В. «Историческое описание одежды и вооружения Российских войск». СПб . 1901, ч. XVIII.
В декабре 1919 года Знамя в числе других регалий Донского музея было вывезено казаками зарубеж, хранилось в Пражском музее. В 1946, когда музейные предметы были возвращены из Праги, знамя сохранилось только фрагментарно. Сохранились фрагменты Государственного герба России и гербов Новгородского, Казанского и Астраханского, а равно фрагмент пальмовых ветвей зеленого цвета и золотых масличных ветвей. Первоначально имелась надпись, содержащая полный Императорский титул и слова: « Дано же знамя Его Императорского Величества верным подданым Войску донскому, за оказанную их во время войны со шведами службу и для учиненного с короною Шведского вечного мира.»
В 1960-е годы знамя было отреставрировано. Фрагменты полотнища укреплены на реставрационной сетке. Знамя было одним из главных экспонатов выставки «И именем Твоим, Великий Петр…», посвященной 350-летию Петра I 2022 году.
